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依據(jù)國家法規(guī),在專業(yè)的PCR實驗(比如臨床PCR檢驗實驗室)室通常需要做到四區(qū)隔離(或至少是三區(qū)隔離)的要求。
一般常見的三區(qū)指的是:
1、試劑配制區(qū):PCR反應(yīng)體系的配制區(qū)域。
2、標(biāo)本處理區(qū):包括擴增模板的制備,也就是我們常常提取DNA的地方;3、PCR擴增和產(chǎn)物分析區(qū):進(jìn)行PCR擴增的區(qū)域,也是擴增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳分析的區(qū)域。
如果將PCR擴增區(qū)域和產(chǎn)物分析區(qū)細(xì)分,那就是典型的四區(qū)隔離了。四區(qū)隔離,主要目的是防止氣溶膠在各個PCR區(qū)域之間的流動,為了避免互相污染,可以針對不同區(qū)域設(shè)置正負(fù)壓的方法:
1.試劑配制區(qū)(Ⅰ區(qū)):最潔凈的區(qū)域,保持微正壓使得外界空氣無法進(jìn)入隔離污染源。并且陰性模板應(yīng)該在此區(qū)加入PCR管并蓋蓋,嚴(yán)禁在此區(qū)域打開、存放裝有DNA模板的離心管;
2.DNA模板添加區(qū)(Ⅱ區(qū)):保持微負(fù)壓,保證內(nèi)部空氣不外泄,以免陽性模板的氣溶膠對外界環(huán)境造成污染。
3.擴增及PCR產(chǎn)物分析區(qū)(Ⅲ區(qū)):保持微負(fù)壓,使得內(nèi)部空氣不外泄,以免擴增產(chǎn)物的氣溶膠對外界環(huán)境造成污染。
在進(jìn)入PCR實驗室,需要在操作時遵循Ⅰ區(qū)→Ⅱ區(qū)→Ⅲ區(qū)單一方向進(jìn)行,不可逆向進(jìn)行。
不然可能會產(chǎn)生氣溶膠污染,出現(xiàn)假陽性結(jié)果!所以PCR實驗室在投入使用之前,首先要經(jīng)過國家授權(quán)的檢測機構(gòu)的檢測,并且取得PCR實驗室檢測合格報告,然后徹底消毒以后,才能正常使用。